全國服務(wù)熱線:400-0731-237
電話:0731-88139741 88139742
傳真:0731-88137983
地址:湖南省長沙市高新技術(shù)開發(fā)區(qū)匯智中路169號金榮·同心國際工業(yè)園A區(qū)7棟
E-mail:
sales@xiangzhilxj.com
售后服務(wù)電話:
周工:136 7748 4590
1.稱取樣品土樣5g,加入滅菌的石英砂,不要液氮研磨,這樣子對DNA傷害很大,幾乎全部片段化了。可以在這步加上PBS洗滌下土壤,一是能夠去除些雜質(zhì),二是能夠使得土壤處于懸浮狀態(tài),然后可以在渦旋儀上劇烈渦旋2-3min,使得土壤顆粒破碎。然后用土壤離心機12000rpm離心5min,棄上清。
2.加入13.5mL的DNA提取Buffer,100微升20mg/mL蛋白酶K,37℃225rpm搖2h;
3.加入700微升20%SDS,65℃水浴2h,間隔15min顛倒搖勻數(shù)次;
4.6000rpm室溫離心15min,收集中間液相層;向沉淀中加入3mLDNA提取液,300微升20%SDS,65℃水浴30min,同上離心,收集中間液相層,合并;重復(fù)一次;這里可以考慮再增加抽提一次?;蛘哂?mL而不是3mL。最后實在裝不下了可以分在兩個50mL離心管里面離心。
5.向收集的液相層中加入等體積氯仿:異戊醇(24:1)抽提一次,8000rpm離心10min,收集上部液相層;在做抽提的時候加用一步酚氯仿,原因是酚能夠更好的使蛋白變性。如果不考慮用酚的話,建議用氯仿異戊醇抽提兩次。會發(fā)現(xiàn)顏色會變清不少。
6.第5步收集液相層中加入0.1倍體積的乙酸鈉,0.6倍體積的異丙醇,室溫放置1-2h;
7.沉淀物12000rpm離心15min,棄上清;向沉淀中加入10mL冷乙醇洗滌,12000rpm離心5min,棄上清;12000rpm離心30sec,移液槍析出殘留液體;
8.室溫自然干燥沉淀,干燥后向沉淀中加入400微升TE溶解。沉淀貼壁很緊,不要用小槍頭吹吸攪動,可以將沉淀浸沒后放置于4度過夜或數(shù)小時,沉淀就會蓬松。
土樣比較特殊,黑色,腐殖質(zhì)等物質(zhì)含量高,這個必須純化,樣品里面太多的多糖類物質(zhì)和腐殖質(zhì),選擇qiagen的40KB的膠回收試劑盒,嫌太貴的話可以考慮電洗脫。
DNA提取液組成:100mM Tris,100mMEDTA,200mMNaCl,2%PVPP,3%CTAB,pH9.0
以上為三次提取的詳細(xì)過程及試劑用量。
注意事項,所有的槍尖,包括1mL的都要去尖后滅菌。每個步驟動作都要輕柔,這樣DNA才會完整。
------ 責(zé)任編輯:
聯(lián)系電話:
湘智離心機版權(quán)所有,轉(zhuǎn)載請注明出處
產(chǎn)品名稱:TD5B醫(yī)用離心機
產(chǎn)品特點:微機控制、無刷電機、噪聲小,專為美容...[詳情>>]
產(chǎn)品名稱:TGL-16MB高速冷凍離
產(chǎn)品特點:具有RCF自動計算,設(shè)有不平衡,超速、超...[詳情>>]
產(chǎn)品名稱:DL-6MB-低速冷凍大容
產(chǎn)品特點:低速冷凍大容量離心機是微機控制,變頻...[詳情>>]
產(chǎn)品名稱:TD6B臺式低速離心機
產(chǎn)品特點:該機適用于生物化學(xué)、放射免疫實驗室...[詳情>>]
產(chǎn)品名稱:TDZ4-WS低速自動平衡
產(chǎn)品特點:微機控制、數(shù)字顯示、全觸摸面板、無...[詳情>>]
產(chǎn)品名稱:XZ-25K高速冷凍離心
產(chǎn)品特點:XZ-25K高速冷凍離心機廣泛應(yīng)用于農(nóng)業(yè)...[詳情>>]
產(chǎn)品名稱:DLM12L超大容量實驗
產(chǎn)品特點:采用國際最先進的數(shù)字控制電路,使離心...[詳情>>]
產(chǎn)品名稱:XZ-16T臺式高速離心
產(chǎn)品特點:微機控制,數(shù)字顯示,無刷電機,觸摸面板...[詳情>>]
產(chǎn)品名稱:XZ-P6脫帽實驗室離心
產(chǎn)品特點:微機控制,交流變頻電機,高精度,低噪音...[詳情>>]
地址:湖南省長沙市高新技術(shù)開發(fā)區(qū)匯智中路169號金榮·同心國際工業(yè)園A7棟6樓 全國服務(wù)熱線:400-0731-237
版權(quán)所有:長沙湘智離心機儀器有限公司,未經(jīng)書面授權(quán),所有頁面內(nèi)容不得以任何形式進行復(fù)制粘貼,一經(jīng)發(fā)現(xiàn)將追究法律責(zé)任,后果自負(fù)!
湘公網(wǎng)安備43019002000533湘ICP備16002798號 Copyright 2004-2019