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鼠肝細(xì)胞器的超速分離方法

時(shí)間:2015年12月22日 信息來源:湘智離心機(jī) 字體: 打印此頁

Ⅰ.前處理:
鼠肝勻漿,臺式離心機(jī)1,000xg,10分,取上清,沉淀稀釋后再1,000xg,10分,取上清,再重復(fù)一次取上清,三次上清液合并用于超速離心。

Ⅱ. 密度梯度離心:
日立超速離心機(jī)(各種型號)
轉(zhuǎn)頭:P45AT(6×94ml,實(shí)際容量85ml)
不連續(xù)蔗糖梯度:10%,20%,30%,40%,50%(w/w),各15ml,樣品約10ml鋪在表面
轉(zhuǎn)速:40,000rpm,186,000xg
時(shí)間:2.5hr
溫度:4℃
加速/減速:6/6

Ⅲ. 結(jié)果:
用日立DGF-U或手工取出梯度液,自上而下收集成30管,每管分別測定密度及測定260nm ABS值并繪成如下曲線:
鼠肝細(xì)胞器的超速分離方法
可以看出:水溶性蛋白沉降在近離心管表面的及低蔗糖密度區(qū);核糖和蛋白體沉降在16%-18%蔗糖密度區(qū);光滑質(zhì)膜沉降在27%-28%蔗糖密度區(qū);質(zhì)膜沉降在37%-38%蔗糖密度區(qū);線粒體沉降在42%-43%蔗糖密度區(qū),而粗質(zhì)膜沉降在45%-46%蔗糖密度區(qū)。




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